بررسی روند aging وaging- antiدر سلولهای بنیادی با استفاده از نانو روی و عصاره گیاه نعناع فلفلی
نام نخستين پديدآور
/مهلا دیلم کتولی
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
: دامپزشکی
تاریخ نشرو بخش و غیره
، ۱۳۹۶
نام توليد کننده
، میرزائی
یادداشتهای مربوط به نشر، بخش و غیره
متن يادداشت
چاپی
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
کارشناسی ارشد
نظم درجات
دامپزشکی
زمان اعطا مدرک
۱۳۹۶/۰۶/۰۵
کسي که مدرک را اعطا کرده
تبریز
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
سلولهای بنیادی سلولهایی تمایز نیافتهاند که توانایی تبدیل و تمایز به انواع مختلف سلول را دارند .این سلولها دارای دو ویژگی مهم هستند که آنها را از سایر سلولها متمایز میکند .توانایی تکثیر نامحدود داشته و در حالت تمایز نیافته باقی میمانند .از مهمترین انواع بالغ این نوع سلولها، سلولهای مزانشیمی میباشند که با گذشت زمان و افزایش طول عمر، به تجمع آسیبهای سلولی حساس میشوند .آسیبهایی که در نهایت میتوانند منجر به از دسترفتن عملکرد احیاکنندگی، ایجاد پیری و در نهایت مرگ سلولها شوند .عوامل مختلفی سبب ایجاد روند ذاتی و آسیبرسان پیری میشوند که فاکتورهای داخلی مانند ژنتیک، بیان برخی از ژن ها همچونP۵۳ وNFKB ، میانکنش بین DNA و پروتئین، رادیکالآزاد و فاکتورهای خارجی همچون تغییرات محیطی که عملکرد سلول را تحت تاثیر قرار میدهند از آن جمله میباشند .از آنجایی که امروزه نانومواد و عصاره های گیاهی به وفور در صنایع مختلف استفاده میشوند، فرضیههای زیادی در مورد تاثیرات مخرب و مطلوب این مواد بر موجودات زنده مطرح میشود .بطوری که باوجود استفاده از نانو روی و عصاره نعناع فلفلی در مقیاس صنعتی، هنوز اطلاعات دقیقی از میزان اثرات مخرب و یا سازندهی آنها بر روند پیری موجودات وجود ندارد .به همین دلیل در این مطالعه، ابتدا آزمایش سنجش سمیت سلولی به منظور تعیین محدودهی سمیت این دو ماده انجام گرفت .بدین منظور در مرحله اول سلولصهای بنیادی مشتق از بافت چربی و مغز استخوان بصورت جداگانه در پلیتهای ۹۶ خانه سید شدند و سپس با غلظتهای ۱ تا ۹۰۰ میکروگرم بر میلیلیتر عصاره نعناع فلفلی) تعداد ۱۵ غلظت (و همچنین غلظتهای ۵۶/۱ تا ۸۰ میکروگرم بر میلیلیتر به ترتیب برای سایز کوچک۱۰) - (nm۳۰و سایز بزرگ۳۵) - (nm۴۵نانوذرات روی) هر کدام با ۹ غلظت (بصورت جداگانه ساخته شدند و برای مدت مشخص تیمار شدند .در نهایت غلظتهای ۵۰ ، ۱۰۰ و۱۵۰ میکروگرم بر میلیگرم نعناع فلفلی و ۵ ، ۱۰و ۱۵ میکروگرم بر میلی گرم نانوذرات روی به عنوان غلظتهای مورد استفاده در آزمایشات بعدی انتخاب شدند .آزمایش فلوسایتومتری به منظور بررسی اثر این مواد بر چرخه سلولی در قدم بعدی انجام گرفت که نتایج بدست آمده نشان از اثر مثبت عصاره نعناع فلفلی بر ورود سلولها به فاز S چرخهی سلولی داشت .در حالی که نانو مواد روی اثر نامطلوبی بر روند ورود سلولها به این فاز به عنوان فازی که در آن سنتز DNA انجام میگیرد نشان دادند .آزمایش بعدی انجام شده به منظور سنجش اثر این مواد بر روند پیری سلولهای بنیادی رنگآمیزی بتاگالاکتوزیداز بود که در این رنگآمیزی سلولهای تیمار شده با نانوذرات روی و عصاره نعناع فلفلی بترتیب بیشترین و کمترین رنگپذیری را داشتند که این موضوع بترتیب بیانگر افزایش و کاهش فعالیت آنزیم بتاگالاکتوزیداز به عنوان آنزیمی با نقش کلیدی در روند پیری سلولها میباشد .در قدم آخر تکنیکPCR - Real Timeبه منظور سنجش میزان بیان ژنهای P۵۳ و NFKB به عنوان عوامل ژنتیکی موثر در روند پیری انجام شد که افزایش بیان این ژنها در سلولهای تیمار شده با دو سایز نانو ذرات و همچنین کاهش بیان آنها در سلولهای تیمار شده با عصاره نعناع فلفلی بیانگر تاثیر منفی نانو ذرات و همچنین تاثیر مثبت عصاره این گیاه بر روند پیری سلولها میباشد .در نهایت با توجه به نتایج بدست آمده از آزمایشات انجام شده میتوان نتیجه گرفت نانو ذرات اکسید روی بخصوص در سایز کوچک موجب تسریع روند پیری سلولهای بنیادی شده که در این میان سلولصهای بنیادی مغز استخوان حساسیت بیشتری از خود نشان دادند .برعکس، عصاره گیاه نعناع فلفلی بدلیل خاصیت آنتی اکسیدانی ثابت شدهی خود از این روند آسیبرسان ممانعت میکند
متن يادداشت
Stem cells are undifferentiated cells that have the ability to transform and differentiate into different cell types. These cells have two important characteristics that differentiate them from others.They have the ability to reproduce unlimited and remain in the undifferentiated state. The most important mature types of these cells are mesenchymal cells, which become more susceptible to accumulation of cell damage with passing time and increase longevity. These damages can help to improving recovery, aging and finally death of cells. Various factors factors cause the intrinsic and harmful process of aging such as internal factors as genetics, the expression of some genes as P53 and NFKB, the interaction between DNA and Pr, free radicals and external factors such as environmental changes that affect the function of the cell. Since nanomaterials and plant extracts are widely used in various industries today, there are many hypotheses about the harmful and helpful effects of these materials on living organisms. Despite the use of these two materials at the industrial scale, there is still no precise information of their harmful effects or builder effects on the aging process of organisms. For this reason, in this study, a cytotoxicity test was first performed to determine the toxicity of these two substances. For this purpose, in the first stage, stem cells derived from adipose tissue and bone marrow. Then the cells were cultured in a 96-well plate separately with concentrations of 1 to 900 g / ml of Peppermint extract (totally 15 concentrations was made) and also concentrations of 56.1 to 80 g / ml for small size (10-10 nm) and large size (35-45 nm) zinc nanoparticles (each one with 9 concentrations) was made and separately tested at specified period of time. Finally, it was selected the concentrations of 50, 100 and 150 micrograms per mg of Peppermint extract and 5, 10 and 15 micrograms per mg of zinc nanoparticles as used concentrations for later experiments. In the next step, Flow cytometry test was conducted to evaluate the effect of these substances on the cell cycle. The results showed that the Peppermint extract had a positive effect on the cell entry to the cell cycle S cycle. While nanomaterials had an adverse effect on the process of cell entry to the S phase, in which DNA synthesis was performed. While nanoscale materials showed destructive effects on the process of entering cells into S phase as a phase synthesis DNA. The next experiment was conducted to evaluate the effect of these materials on the aging process of stem cells using -galactosidase staining test, which had the highest and lowest coloration of the treated with nano-particles and Peppermint extract, respectively, which indicates an increase and decrease of the -galactosidase enzyme activity as an enzyme that plays a key role in the aging process of the cells. In the last step, the Real Time-PCR technique was used to measure the expression of P53 and NFKB genes as an effective genetic factor in the aging process, which increased the expression of these genes in treated cells with two different nanoparticle sizes and decreased their expression in cells treated with Peppermint extract indicates the negative effect of nanoparticles and also the positive effect of the extract on the aging process of the cells. Finally, according to the results obtained of the experiments, it can be concluded that, in particular, small amounts of zinc oxide nanoparticles accelerate the aging process of stem cells, in which the bone marrow stem cells are more susceptible. On the contrary, Peppermint extract prevents this process due to its proven antioxidant properties
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )