بررسی اثر داربست های بدون سلول رحمی حاوی سایتوکاین های IFN-γوIL-4 بر تمایز ماکروفاژها و بیان فاکتورهای رگ زایی VEGF وPDGF-BB
General Material Designation
[پایان نامه]
First Statement of Responsibility
معصومه معصومی کریمی
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Name of Publisher, Distributor, etc.
دانشگاه علوم پزشکی تهران، دانشکده پزشکی
Date of Publication, Distribution, etc.
۱۴۰۱
PHYSICAL DESCRIPTION
Specific Material Designation and Extent of Item
۱۴۸ص
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
دکتری تخصصی(PhD)
Discipline of degree
ایمنی شناسی پزشکی
Date of degree
۱۴۰۱/۰۵/۰۹
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
مقدمه: امروزه توسعه روش¬های مهندسی زیستی به منظور طراحی بافت رحم بدون سلول جهت بازگرداندن باروری مورد توجه قرارگرفته است. از آنجایی که ماکروفاژهای M1 جهت آغاز و ماکروفاژهای M2 در مرحله بلوغ روند رگ زایی نقش دارند، هدف از این مطالعه طراحی داربست بدون سلول رحم بود تا با آزادسازی متوالی IFN-γ و IL-4 تمایز M1 به M2 ماکروفاژها را تسهیل کند و رگ زایی داربست های رحم را افزایش دهد.روش کار: 4پروتوکل مختلف (P1-P4) جهت بهینه سازی فرآیند حذف سلولی از بافت رحم رت انجام شد. به منظور تایید حذف سلولی، عدم سایتوتوکسیسیته داربست تولید شده و همچنین حفظ ساختار بافت، تست هایی همچون رنگ آمیزی هماتوکسیلین-ائوزین، رنگ آمیزی تری کروماسون، اندازه گیری میزان DNA، تست کشش، تصویربرداری FESEM، تستMTT و خون سازگاری انجام شد. با هدف آزادسازی ترتیبی دوسایتوکاین، IFN-γ با جذب فیزیکی(جهت آزادسازی سریع) و IL-4 بیوتینه با لینکر بیوتین – استرپتاویدین (جهت آزادسازی تاخیری) به داربستها متصل شدند. بعد از تایید آزاد شدن سایتوکاینها از ۳ گروه داربست (IFN-γ، IL-4 و هر دو سایتوکاین (Combo))، ماکروفاژهای مشتق شده از مغز استخوان روی داربست¬ها قرار داده شدند. بیان شاخص تمایزی ماکروفاژ M1 (TNF-α، CD86،iNOS) و M2 (CD206، آرژیناز) و همچنین فاکتورهای رگ¬زایی ( VEGFوPDGF-BB) در هر 3 گروه داربست حامل سایتوکاین و گروه کنترل با تست Real Time-PCR مقایسه شدند.نتایج: بر اساس برایند نتایج تست ها، پروتوکل P4 به عنوان پروتوکل ارجح جهت ادامه مطالعه انتخاب شد. آزادسازی ترتیبی سایتوکاین IFN-γ و IL-4 از داربست¬های حامل این سایتوکاین ها تائید شد. بررسی بیان ژن¬ها در ماکروفاژهای کاشته شده روی داربست ها نشان داد که در گروه IFN-γ در روز 3 بیان iNOS و CD206 و در روز 6 بیان آرژیناز و هردو فاکتور رگ زایی VEGFو PDGF افزایش معنی داری نسبت به گروه کنترل داشت. در گروه IL-4 هیچ یک از شاخص های تمایزی M2 و فاکتورهای رگ زایی در روز 3 و 6 تفاوت معنی داری با گروه کنترل نداشت. در گروه Combo نیز در روز 3، بیان TNF-α و در روز 6، تنها بیان VEGF افزایش معنی داری با گروه کنترل داشت در حالی که بیان CD86 در هر دو گروه IL-4 وCombo در روز سوم و ششم بطور معنی دار نسبت به گروه کنترل کاهش یافته بود.نتیجه گیری:ماکروفاژهای کاشته شده روی هیچ یک از سه گروه داربستهای بدون سلول حاوی سایتوکاین توانایی القای بیان فاکتورهای رگ¬زایی را در روزهای ابتدایی نداشته است و تنها دو گروه IFN-γ و Combo از روز ششم توانایی شروع فرایند رگ_زایی را دارند.