بررسی خصوصیات مرفومتریک و مولکولی گونههای تریکواسترنژیلوس جداشده از دامهای کشتارگاهی کاشان ۱۳۹۷-۹۶
General Material Designation
[پایاننامه]
First Statement of Responsibility
/علی محمد بخشی
.PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC
Place of Publication, Distribution, etc.
[بی جا]
Name of Publisher, Distributor, etc.
: پزشکی
Date of Publication, Distribution, etc.
، ۱۳۹۷
PHYSICAL DESCRIPTION
Specific Material Designation and Extent of Item
۵۰ص.
NOTES PERTAINING TO PUBLICATION, DISTRIBUTION, ETC.
Text of Note
چاپی - لوح فشرده
DISSERTATION (THESIS) NOTE
Dissertation or thesis details and type of degree
کارشناسی ارشد
Discipline of degree
انگل شناسی
Body granting the degree
علوم پزشکی کاشان
SUMMARY OR ABSTRACT
Text of Note
سابقه و هدف :تریکوسترنژیلوس عامل بیماری تریکوسترنژیلیازیس در انسان، حیوانات اهلی و وحشی با گسترش جهانی است که باعث تحمیل خسارات قابلتوجهی به اقتصاد دامپروری کشورها میشود .این بیماری در ایران در بین دامهای اهلی از شیوع قابلتوجهی برخوردار است .تاکنون از تشخیصهای مرفولوژیک بهعنوان یک ابزار قابلاطمینان برای شناسایی گونههای ایجادکننده بیماری استفاده میشده است .با توجه به اهمیت آلودگی و عوارض ناشی از آن، مطالعه حاضر باهدف تشخیص گونههای انگل با استفاده از روش مرفومتریک و مولکولی روی گوسفندان و بزهای کشتار شده در کشتارگاه کاشان طی سالهای۱۳۹۶ - ۹۷صورت پذیرفت .مواد و روش ها :مطالعه حاضر با طراحی مقطعی و بهصورت تصادفی روی ۲۸۴ دام شامل ۱۳۰:رأس بز و ۱۵۴ رأس گوسفند صورت گرفت .پس از ذبح کامل حیوان، روده کوچک جمعآوری و سریعا جهت بررسیهای انگلشناسی به آزمایشگاه منتقل گردید .با استفاده از قیچی مخصوص روده حیوان کاملا بازشده و نسبت به جمعآوری و تشخیص جنس و گونه کرم با استفاده از کلیدهای تشخیصی اقدام گردید .در این بررسی ۵ شاخص مرفومتریک کرم نر شامل :طول و عرض بدن، عرض کیسه جفتگیری، طول و شکل اسپیکول ها و گوبرناکولوم موردسنجش قرار گرفت .نتایج حاصل از بررسی مرفومتریک با استفاده از نرمافزار SPSS ۱۸ و آزمونهای ANOVA مورد قضاوت قرار گرفت .همچنین فاصله اطمینان شیوع هرکدام از کرمهای مشاهدهشده محاسبه گردید .در مرحله دوم کرمهای نر و ماده برای استخراج DNA استفاده شد .در این مطالعه پرایمر اختصاصی برای ژن ریبوزومی ITS۲ با استفاده از نرمافزارهای مولکولی جهت تعیین گونه طراحیشده و بهمنظور حصول اطمینان از تکثیر ژن موردمطالعه، Blastگردید .برای انجام واکنشRFLP -PCRابتدا آنزیم محدودالاثر (Restriction) مناسب با استفاده از نرمافزارهای مولکولی Webcutter و Nebcutter انتخابشده از بین آنزیمهای موجود، بر اساس سکانس موجود بهترین آنزیمها یعنی RsaI و MspI انتخاب گردید .بهمنظور تعیین اختلافات ژنتیکی بین ایزولهها و همچنین در مقایسه با موارد ثبتشده در بانک ژن، تعیین میزان مشابهت ژنتیکی و همترازی چندگانه بین ایزولهها، محصول PCR۳۰ ایزوله انتخابی با اختلافات مرفولوژیک تعیین توالی شد .بدین منظور توالیهای بهدستآمده Blast شده، سپس با استفاده از نرمافزار مولکولی ClASTALW۲ میزان قرابت ژنتیکی دو بدوی ایزولهها و همچنین با موارد ثبتشده تعیین و جداول مربوطه تهیه شد .بهمنظور مقایسه وضعیت ژنتیکی ایزولههای موردمطالعه با موارد ثبتشده در بانک ژن درخت فیلوژنتیک ترسیم و تفسیر شد .یافته ها :از ۲۸۴ دام موردمطالعه، ۲۶ رأس (۱۵/۹ درصد (آلوده به انواع نماتودهای جنس تریکواسترونژیلوس بود(C.I=۹.۱۵ ▒ .۳.۳۵)نسبت آلودگی به انگل در بز ۳/۱۲ درصد و در گوسفند ۵/۶ درصد بود .از ۲۶ دام آلوده ۷۰ ایزوله کرم موردبررسی مرفومتریک قرار گرفت که از این تعداد ۳۹ ایزوله مربوط به کرم نر و ۳۱ ایزوله مربوط به کرمهای ماده بود .بر اساس شاخصهای مرفومتریک کرم نر گونههای تریکوسترونژیلوس کولبرفورمیس با ۲۵.۳ درصد و ویترینوس با ۳/۱۳ درصد دارای بیشترین فراوانی و گونههای کاپریکولا و پروبلروس با ۷/۶ درصد کمترین فراوانی را داشتند .همچنین نشان داده شد در گونه تریکوسترونژیلوس پروبلوروس طول اسپیکول و گروبرناکولوم و عرض کیسه جفتگیری به ترتیب با۶۴/۵ :▒۳۴/۱۵۸،۳۶/۷ ▒ ۱/۸۸و۲۳/۳۹ ▒ ۹۳/۲۸۴از بقیه گونههای از رقم بالاتری برخوردار بود .در نتیجه واکنشPCR ، وجودقطعات ۱۷۹ جفت باز تا ۱۹۰ جفت باز را درایزوله های موردمطالعه نشان داد که درهرچهار گونه شناسایی شده وضعیت مشابهی دارد .دراین مطالعه پس از بلاست نمودن هریک از دادهها، نتایج بهگونهای بود که درصد همولوژی بین ۹۳ تا ۱۰۰ درصد با موارد ایرانی و خارجی ثبتشده در بانک ژنی بود .نتیجهگیری :با استفاده از شاخصصهای مرفولوژیک و موفومتریک و همچنین تکنیکصهای مولکولیIRFLP - PCRو تعیین توالی بااستفاده از مارکر ژنتیکی ITS۲ چهارگونه کولبریفورمیس، کاپری کولا، ویترینوس و پروبولوروس دردامصهای منطقه شناسائی شد که ازمیان آنها تریکوسترونژیلوس کولبریفورمیس شایعترین گونه بود .با توجه به زئونوزبودن این نماتودها احتمال آلودگی انسانی مطرح میشود .واژههای کلیدی :تریکوسترونژیلوس، گوسفند، بز، تشخیص مورفولوژی ومرفومتریک،ITS۲ ، درخت فیلوژنتیک، کاشان