شماره کتابشناسی ملی
شماره
۲۱۵۲۱پ
زبان اثر
زبان متن نوشتاري يا گفتاري و مانند آن
per
عنوان و نام پديدآور
عنوان اصلي
ایجاد جهش در ژن fatB کلزا (.(Brassica napus L از طریقCRISPR/Cas۹
عنوان اصلي به زبان ديگر
Mutation induction in fatB gene of rape (Brassica napus L.) by CRISPR/Cas۹
نام نخستين پديدآور
/زهرا محمدی
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
: کشاورزی
تاریخ نشرو بخش و غیره
، ۱۳۹۷
نام توليد کننده
، میرزائی
مشخصات ظاهری
نام خاص و کميت اثر
۶۲ص
یادداشتهای مربوط به نشر، بخش و غیره
متن يادداشت
چاپی - الکترونیکی
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
کارشناسی ارشد
نظم درجات
بیوتکنولوژی کشاورزی
زمان اعطا مدرک
۱۳۹۷/۱۱/۱۵
کسي که مدرک را اعطا کرده
تبریز
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
کاربردهای مختلف خوراکی و صنعتی روغن نباتی توجه محققین را همواره به خود جلب نموده است .از بین گیاهان زراعی کلزا (.(Brassica napus L برای کشت در نواحی مختلف توسعه و در ایران نیز طی سال‌صهای اخیر گسترش یافته است .یکی از روش‌صهای تغییر کیفی کلزا استفاده از مهندس ژنتیک گیاهی است .در این تحقیق از کار انداختن ژن fatB هدف‌صگیری شده است .تا به امروز فعالیت این ژن از طریق RNAi مهندسی شده است ولی کارایی آن در حذف کامل فعالیت ژن ناموفق بوده است .با تولید گیاهان فاقد آنزیم FatBمی‌صتوان به اثرات اصلی و جانبی آن در مقایسه با شاهد پی برد .در تحقیق حاضر از سیستم ویرایش ژنوم CRISPR/Cas۹ استفاده می‌صشود که از دو بخش پروتئین Cas۹ که نوعی آندونوکلئاز است و یک توالی RNA راهنما (gRNA) تشکیل شده است .برای هدف‌صگیری ژن fatB از طریقgRNA ، اطلاعات نوکلئوتیدی توالی‌صهای ژن fatB در بانک‌ص داده‌های نوکلئوتیدی NCBI در کلزا بررسی و از ناحیه مورد نظر توالی crRNA با نرم افزار آنلاین CRISPOR تعیین شد در ابتدای این توالی، قطعه راه انداز U۶ آرابیدوپسیس و در انتهای آن توالی RNA داربستی متصل شونده بهCas۹ تعبیه شده و پس از افزودن توالی مکان‌صهای برشی مورد نیاز در دو انتها برای سنتز سفارش داده شد .قطعه سنتز شده از طریق برش آنزیمی با آنزیم های Xba۱ و EcoR۱از پلاسمید pBluescript در پلاسمیدpcoCas۹ - pFGCهمسانه سازی شد .پس از استخراج پلاسمید حاصله از باکتری‌صها و پوشش‌صدار کردن ذرات تنگستن ( M۱۷ به قطر ۱/۱ میکرون (باpcoCas۹ - pFGCدارای کاستfatB)- gRNA (pFGC، بمباران ریز نمونه‌صهای کوتیلدون و هیپوکوتیل واریته Okapi توسط تفنگ ژنی طبق دستورالعمل بیوراد (BioRad., PDS۱۰۰۰/He) صورت گرفت .پس از بمباران، ریزنمونه‌صها به محیط باززایی و حاوی علفکش باستا بعنوان ماده گزینشگر) به‌صترتیب محیط القای کالوس دارایD=۱ mg/l - ۲,۴، محیط باززایی دارای BAP= ۱/۵ mg/l و محیط گزینش حاوی ۰/۸ mg/lعلف کش باستا (انتقال و گیاهان تراریخته احتمالی در محیط گزینش تولید شدند
متن يادداشت
Divergent edible and industrial uses of vegetable oils have always attracted the attraction of researches. Among the cultivated plants, rapseed (Brassica napus L.) has been exponded and planted in different areas which has been developed in Iran recently.One of the methods of qualitative change in rapseed is the usage of plant genetic engineering. In this research, the gene knock out af fatB gene is targeted. Prior to now, the activity of this gene has been engineered through RNAi, but its effectivenees in the complete elimination of the gene activity has failed.By producing the plants without FatB enzyme its main and side effects can be compared to the control. In this current research, the CRISPR/Cas9 genome editing system was used, including Cas9 which is an endonuclease and a guide RNA sequence (gRNA) In order to target the fatB gene through gRNA, the information of nucleotide sequence of the fatB gene in rapseed was investigated in the NCBI and the crRNA sequence was determined from the desired region with the CRISPOR online software. At beginning andend of the sequence,the U6 promoter of Arabidopsis and a RNA scaffold attached to Cas9 was embedded respectively. Eventually, aftter the addition of required cutting sites at the two ends it was ordered to synthesize. Following that, the synthesized frogment was restricted from pBluscript Plasmid via XbaI and EcoRI enzyme. Then it was cloned in Pfgc-pcoCas9 plasmid. Subsequently, the plasmid was extracted from bacteria. After covering tungsten porticeles (M17, 1/1 micron in diameter) with Pfgc-pcoCas9 containing a gRNA cassette (pFGC-fatB), the bombardment of the explants of cotyledon and hypocotyl of Okapi variety was carried out with gene gun according BioRads instruction (BioRad., PD 1000/He). After the bombardment, the explants were transported to the regeneration medium containing Basta herbicide as a selective material (the callus induction medium, the regeneration medium and the selection medium including 2.4.D=1 mg/L, BAP=1/5 mg/L and Basta herbicide=1g/L, respectively). Then the possible transgenic plants were prouduced in the selection medium
عنوان اصلی به زبان دیگر
عنوان اصلي به زبان ديگر
Mutation induction in fatB gene of rape (Brassica napus L.) by CRISPR/Cas۹
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )
مستند نام اشخاص تاييد نشده
محمدی، زهرا
مستند نام اشخاص تاييد نشده
Mohammadi, zahra
دسترسی و محل الکترونیکی
يادداشت عمومي
سیاه و سفید
وضعیت فهرست نویسی
وضعیت فهرست نویسی
نمایه‌سازی قبلی
