اثر ترکیبات مبندازول و فبانتل بر روی پارامترهای بیوشیمیایی آنزیم لاکتوپراکسیداز تحت شرایط in vitro
نام نخستين پديدآور
مریم تاتی
وضعیت نشر و پخش و غیره
نام ناشر، پخش کننده و غيره
دامپزشکی
تاریخ نشرو بخش و غیره
۱۴۰۱
مشخصات ظاهری
نام خاص و کميت اثر
۷۳ص.
مواد همراه اثر
cd
یادداشتهای مربوط به پایان نامه ها
جزئيات پايان نامه و نوع درجه آن
کارشناسی ارشد
نظم درجات
بیوشیمی گرایش بالینی
زمان اعطا مدرک
۱۴۰۱/۰۲/۲۷
یادداشتهای مربوط به خلاصه یا چکیده
متن يادداشت
لاکتوپراکسیداز یک گلیکوهموپروتئین از خانواده پراکسیداز پستانداران با خاصیت ضد میکروبی و آنتی اکسیدانی است که درترشحات برون ریز مانند بزاق، اشک و شیر، مخاط دهانه رحم، مخاط دستگاه تنفسی یافت می شود. این آنزیم در یک واکنش ایمنی خاص بر علیه باکتری ها، قارچ ها و ویروس های غشای مخاطی فعال می شود. لاکتوپراکسیداز مشتق شده از شیر گاو از لحاظ ساختاری و عملکردی با آنزیم لاکتوپراکسیداز انسانی شباهت داشته و در لوازم آرایشی، بهداشتی و پزشکی کاربرد دارد.لاکتوپراکسیداز یونهای تیوسیانات (SCN ˉ) را در حضور پراکسید هیدروژن (H2O2) به محصولاتی که فعالیت ضد میکروبی از خود نشان می دهند تبدیل می کند. مکانیسم عملکرد این سیستم بر اساس اکسیداسیون یون های تیوسیانات (همچنین یدیدها و برومیدها) به یون های هیپوتیوسیانیت (هیپو یدیدها و هیپو برومیدها) با استفاده از پراکسید هیدروژن است. در این تحقیق اثر دو ترکیب ضد انگلی مبندازول و فبانتل بر خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم LPO خالص شده با منشا گاوی تحت شرایط in Vitro با روش اسپکتروفتومتری بررسی گردید. خلوص آنزیم LPO از طریق تکنیک ژل الکتروفورز SDS-PAGE بااستفاده از متد لاملی بررسی و وجود یک باند با وزن مولکولی 78 کیلو دالتون تایید گردید. بررسی اثر pH های مختلف بر عملکرد آنزیم لاکتوپراکسیداز گاوی pH=6 را بهترینpH برای عملکرد آنزیم نشان داد. میزان Vmaxو Km آنزیم لاکتوپراکسیداز گاوی با غلظت nM 4از طریق رسم نمودار لینویوربرک برای سوبسترای ABTS به ترتیب برابر با 03/0± 62/8 و 003/0±578/0 و برای سوبسترای H2O2 به ترتیب برابر046/0 ±93/2 و 0005/0±029/0 به دست آمد، نتایج این تحقیق نشان داد که دو ترکیب مبندازول و فبانتل اثر مهاری بر فعالیت آنزیم داشته و مکانیسم این اثر بصورت وابسته به زمان نبوده بلکه وابسته به دوز می باشد. بامحاسبه میزان IC50 برای هریک از ترکیبات مبندازول و فبانتل مشخص شد که تاثیر مهاری ترکیب مبندازول نسبت به فبانتل تحت شرایط یکسان بیشتر است. همچنین میزان ثابت مهاری کمپلکس آنزیم-مهارمننده (Ki) که نوعی قدرت اتصال لیگاند به آنزیم را نشان می دهد، در مورد مبندازول نسبت به فبانتل به میزان 55/2 برابر کمتر و همچنین قدرت اتصال این لیگاند نسبت به فبانتل بیشتر است. از طریق رسم نمودار لینویوربرک در حضور غلظت های مختلف مبندازول و فبانتل مکانیسم مهار آنزیم به ترتیب برای هریک از لیگاند های فوق غیر رقابتی (non competitive ) و رقابتی( competitive) تشخیص داده شد لذا جایگاه اتصال این دو لیگاند برروی آنزیم لاکتوپراکسیداز متفاوت است، همچنین با بررسی ثابت سرعت K1(ثابت سرعت اتصال آنزیم-سوبسترای اول(H2O2)) و K4(ثابت سرعت اتصال کمپلکس آنزیم-سوبسترا به سوبسترای دهنده الکترون یا ABTS) مشخص شد که هم ترکیب مبندازول و هم ترکیب فبانتل تاثیر بیشتری برروی ثابت سرعت K4 نسبت به ثابت سرعت K1 نشان میدهدکه بیانگر تاثیر بیشتر این دو ترکیب برروی جایگاه اتصال سوبسترا دوم (ABTS) در مهار آنزیم لاکتوپراکسیداز می باشد. با توجه به مصرف دو ترکیب مبندازول و فبانتل به عنوان دارو های ضد انگل و همچنین اثر مهاری این دو ترکیب بر عملکرد آنزیم لاکتوپراکسیداز، هنگام استفاده از این دو ترکیب باید احتیاط لازم در دوز مصرفی رعایت گردد.
متن يادداشت
Lactoperoxidase is a glycohemoprotein of the mammalian peroxidase family with antimicrobial and antioxidant properties that is found in exocrine secretions such as saliva, tears and milk, cervical mucosa, and respiratory mucosa. This enzyme is activated in a specific immune reaction against bacteria, fungi and viruses of the mucous membrane. Cow's milk-derived lactoperoxidase is structurally and functionally similar to human lactoperoxidase and is used in cosmetics, health and medicine.Lactoperoxidase in saliva is one of the important enzymes for maintaining oral health. Lactoperoxidase is a glycoprotein that has a defense role but does not belong to the group of immunoglobulins. Lactoperoxidase converts thiocyanate (SCN−) ions in the presence of hydrogen peroxide (H2O2) to products that exhibit antimicrobial activity. The mechanism of action of this system is based on the oxidation of thiocyanate ions (also iodides and bromides) to hypothiocyanite ions (hypoids and hypo bromides) using hydrogen peroxide. In this study, the effect of two antiparasitic compounds including mebendazole and phantel on the biochemical properties of purified LPO enzyme of bovine origin was investigated in vitro by spectrophotometry. The purity of LPO enzyme was investigated by SDS-PAGE gel electrophoresis technique using lamellar method and the presence of a band with a molecular weight of 78 kDa was confirmed. The pH profile of enzymatic activity showed the optimal pH of lactoperoxidase activity of bovine origin equal to pH = 6. The constant values of Vmax, Km of the enzyme in the presence of a constant concentration of 4 nm of the enzyme in the combination of mebendazole and Fabantel on lactoperoxidase activity at different times showed that although the effect of these two compounds in inhibiting lactoperoxidase was not time dependent and only dependent on Is the dose. The amount of Ic50 (concentration of ligand that reduces enzyme activity by 50%) obtained for mebendazole was about 0.508 μM compared to IC50 of Fabantel. Therefore, the combination of Mebendazole with Fabantel under the same conditions had a more severe inhibitory effect on enzyme activity. Shows lactoperoxidase. The results also showed that the inhibitory constant of the enzyme-inhibitor complex (Ki), which shows a kind of ligand-binding power to the enzyme, is 2.55 μM higher in the case of Fabantel ligand than mebendazole. The mechanism of enzyme inhibition was detected by the non-competitive mebendazole compound in the presence of a competitive phantom compound. It was found that both the combination of mebendazole and Fabantel had a greater effect on the K4 velocity constant than the K1 velocity constant, indicating a greater effect of the two compounds on the binding site of the second substrate (ABTS) in inhibiting the enzyme lactoperoxidase
عنوانهای گونه گون دیگر
عنوان گونه گون
The effect of mebendazole and febantel on biochemical parameters of lactoperoxidase under in vitro conditions
نام شخص به منزله سر شناسه - (مسئولیت معنوی درجه اول )